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      NEB內切酶的對照實驗怎么做

      發布時間:2021-10-26 點擊次數:584次
        NEB內切酶可提供210多種內切酶,其中有130多種內切酶為重組酶。重組技術的運用,使NEB能在提高內切酶的純度及品質的同時,削減生產費用。
        加入酶之前將反應混合物混勻,可以用移液槍上下吹打或輕彈管壁,然后在離心機中快速離心。切忌振蕩混勻。
        一般情況下,我們推薦使用5-10單位酶量/μgDNA,基因組DNA用10-20單位酶量消化1小時。入內切酶的量應不超過總體積的10%,以避免甘油過量引起的星號活性。貯存液中的添加物和底物溶液中尚存的殘余物(會導致小體積反應出現問題。如果在切割底物DNA時遇到了問題,建議加入以下對照實驗:
        1、酶切對照DNA(含有多個已知內切酶切割位點的DNA,如LambdaDNA或腺病毒-2DNA),以檢測內切酶的活性。
        2、如果對照DNA能夠被切割而實驗中的底物DNA不能,可以將這兩種DNA混合在一起再進行酶切,以檢測實驗用的底物DNA中是否存在抑制反應的物質。如果確實存在某種抑制因子(通常為鹽、EDTA或酚),則混合之后對照DNA也不能被切割。
        3、當內切酶在非zui適條件下使用時可能會產生星號活性。
        4、可以通過以下方法降低星號活性:使用高保真(HF)內切酶、縮短溫育時間、使用省時內切酶或者增大反應體積。

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